折叠 编辑本段 技术发展
1992年,梁朋 和Pardee首次提出差异显示技术(DD-PCR),并且利用这一技术克隆了几个基因。由于该技术具有快速、灵敏、简单和可分析低丰度mRNA的优点,很快成为克隆新基因和研究植物基因表达的有力工具。这项技术最初用于医学研究上,近年来兰鱼感黄测为的味何七已开始在高等植物研究中应用,为研究高等植物的发育、生理代谢、基因表达提供了重要的技术手段。
折叠 编辑本段 技术步骤
从植物组织中提取总RNA
在这个步骤中注意不能有DNA污染,一般用无RNA酶的DNA酶在37℃下处理30 min
以Oligo T11MN 为引物(M为G、A、C中的任一种,N为A星、C、G、T任一种),进行逆转好制却训而录
扩增cDNA的雨相效提无住提节第一条链
使差异表达的cDNA片段在6%测序胶上分开
从胶上切割下来,并回罪农消世心治确走收,再进行第二次扩增;
差异片克敌段
差异片段可作为探针;
验证目的片段,去掉假阳性片段;
从基因组文库中球青任或筛选出相应的全长天似飞婷乎亚专基因。
技术优势
差异显示技术由于充分利用PCR技术和反转录,因此比较快速,且利用该技术能够观察细胞中mRNA的组成,了解植物不甚胡第同发育阶段或不同环境条件下的细胞之间的差异表达,克隆目的基因。
折叠 编辑本段 应用领域
研究激素对植物发育的影响
研究植物发育过程
研究讲护尼开说抗病机制
研究次生代谢途径
研究抗冷机理