2020-09-05 15:38:23

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双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制。会遇到蛋白质显紫色。

双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。

双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾,会延长试剂的使用寿命。酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。

基本信息

  • 中文名

    双缩脲试剂

  • 英文名

    Biuret Reagent

  • 应用

    验证蛋白质的存在

  • 相关反应

    双缩脲反应

  • 制作

    双缩脲试剂A、双缩脲试剂B合成

折叠 编辑本段 反应原理

需要注意的是,能与双缩脲试剂发生紫色反应的化合物分子中至少含有两个肽键。因此,二肽无法用它来检验。

折叠 编辑本段 配制

双缩脲试剂A是质量分数为0.1 g/mL的NaOH水溶液;

双缩脲试剂B是质量分数为0.01 g/mL的CuSO4水溶液.

先在待测液中加入双缩脲试剂A 3mL,振荡均匀(营造碱性环境),再加入1~2滴双缩脲试剂B,振荡均匀。如果待测液里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。

蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

折叠 编辑本段 注意事项

在使用双缩脲试剂时候,必须注意,必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液,再加入氢氧化钠[NaOH]溶液,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的。

折叠 编辑本段 与双缩脲区别

双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。

双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成

双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液;

双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。

双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在,遇蛋白质产生紫色。

简单的说, 双缩脲是一种化学物质,而检测蛋白质用的那两个试剂之所以叫双缩脲试剂,是因为检测原理和双缩脲的形成相似。

折叠 编辑本段 方法学评价

双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物,在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,双缩脲反应产生的紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。

优点:双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质,操作简单、快捷。既适合手工操作,又适合自动化分析,重复性好、线性关系好, 双缩脲试剂可以长期保存( 若贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制)。

缺点:灵敏度差,测定范围窄,样品需要量大,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,因此它常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。 干扰测定的物质包括有:在性质上是氨基酸或肽的缓冲液,如TrIs缓冲液,因为它们产生阳性呈色反应,铜离子也容易被还原,有时出现红色沉淀。

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