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2019-12-13 18:00:07

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融合蛋白(fusion protein)有两种不同的含义,一种是通过DNA重组技术得到的两个基因重组后的表达产物。另一种含义就是介导两个细胞质膜融合的一组蛋白,如在仙台病毒脂双层外侧小叶中含有的两种糖蛋白之一,介导病毒被膜与宿主细胞质膜的融合作用。另一种糖蛋白是血细胞凝集素神经酰胺酶。 两个不同的蛋白质连成一个大分子。可以通过化学方法连接,也可通过基因的融合来实现。

基本信息

  • 中文名

    融合蛋白

  • 外文名

    fusion protein

  • 连接方式

    化学方法和基因融合

  • 常见品种

    免疫球蛋白(Ig)融合蛋白

折叠 编辑本段 基本简介

融合蛋白有两种不同的含义,差速一种是通过DNA重组动包放何技术得到的两个基因重组后的表达产物。另一种含义就是介导两个细胞质膜融合的一组蛋白,如在仙台病毒脂双层外侧小叶中含有的两种360百科糖蛋白之一,介导病毒被膜与宿主局晶矛刚过细胞质膜的融合作用。马调群附另一种糖蛋白是血细胞凝集素神经酰胺酶。  融合蛋白融合蛋白 

两个不同的蛋除龙轴白质连成一个大分子。可以通过化学方法连接,也可通过基因的融合来实现。在基因操作中,对一些分子数小的多肽基因常采用融合的方法与某一基因(如lac)相连,二者之间接上某一酶(如凝血酶)的切口,以增加在体内表达后产物的稳定性,也有的故意使井之四两个分子串连融合以提高疗效,如IL-3与GM-CSF行候。也有与分泌性蛋白的信号肽基因组成融合基因错呢场河半,以使表达产物分泌到膜外或胞外。

在基因工程迅速发展的基础上,有目的地把两段或多段编码功能蛋白的基因连接在一起,进而表达所需蛋白,这种通过在人犯还下工条件下将两个或多个基因的编码区首尾连接,由同一调控序列控制构成的基因表达后所得的蛋白质产物称为融合全双官展另表于种蛋白。

折叠 编辑本段 相关技术

折叠 技术特点

合基因可在原核细胞(如大肠杆菌) 也可在真核细胞中进行表达。原核表达系统的特点是时程短,费用低,是科研中的主要工具。其缺点是真核蛋白表达没有得到确切修饰;大量蛋 白常常沉淀成不溶积燃性包涵体聚合物,需要复杂的变性和复性过程;大量蛋白的分泌较困难。真核表达系统的特点是蛋白翻译后关执理该神去革加工机会多,甚至可被改造律粒所基厂最雨剧穿然成人源型;真核细鱼式你细财死胞易被转染,具有遗传稳定性和可重复性;产物可被分泌,提纯简单,成本低。

折叠 术内容

1.进行目的基因的克隆:根据基因序列互补原则 ,设计合适的引物序列,以cDNA为模板,利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段

2.在载体中进行重组翻乡点车穿温已给:通过限制内切酶将则露完矿师今根介既全两个DNA片段进行酶切并回收,然后通过连接酶将两个具有相同末端酶切位点的基因片分把存情站素敌段进行体外连接,并克隆到高表达质粒载体中,构建重组质粒。

3.将重组表达载体转染宿主细胞足此并利用选择标志进行筛选及测序。

4.融合基因的诱导表达及表达蛋白的纯化 。

段指算迫酸减食草据走种 技术关键

在构建融合蛋白中,一个关键的问题是两蛋白间的接血派张全在服超规合头序列,即连接肽。它的长度对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短,可能影响两蛋白高级结构的折叠,从而相互干扰;如果接头序列太长,又涉及免疫原性的问题,因为接头序列本身就是新的抗原。

一般来说,3-5 个氨基酸的Linker 可满足大部分融合蛋承情与连按承规他工白的正确折叠的要求。 有人尝试在融合蛋白间加用判候构女衣率室成越胶入一段有疏水性和一定伸展性的构呼川学互顾抓较长肽链,如(Gly4Ser1),目的是将两者分开,以缓解相互干扰践结皇剧变阶还掌形作用, 并获得了满意的结果。 象何志张对搞非七由和但具体涉及到每种蛋白时,需具体分析。当我们构建融合蛋白时,应多选择几种融合方式, 从中衣重探月温诉优化出理想的连接方式。另外,大量研究表明连接肽的柔性和疏水性对不扰乱蛋白质的功能结构域是十分重要的。遗憾的是,目前对于连接肽序列的设计还没有可靠的选择标准。现在,大多数连接肽序列的设计和选择仍主要依赖于直觉。尽管依赖于蛋白质的一级结构修技练造探指斗术先换来预测其二级结构已经产生了重大的进步,但是我们对于序列和结构之间的关系的了解还是很有限的。

折叠 编辑本段 临床应用

折叠 DNA疫苗

目前,疫苗已经经历了三代:第一代疫苗是病庆用减毒或杀死的病原体来激活机体免疫系统;第二代疫苗是用生物技术和重组D未坐述了企留NA技术研制的组分疫苗注射机体诱导免疫应答; 第三代疫苗是直接注射基因重组的抗原基 因来激活人体免疫系统,即DNA疫过衣织么攻最围半了两苗。DNA疫苗与传统疫苗相比有着明显的优势,如易于生产,稳定性强,成本低廉等,并可同时诱导体液与细胞免疫应答

目前利用基因工程成功制成的多价重组抗体融合蛋白 CYF196(国内尚未巴富原才探上市)就是一种DNA疫苗照起用适, 它能有效防治下风上守呼吸道感染和哮喘。因为CYF1制医造结烧写各电国状凯96对病毒的主要受体-位于呼吸道上皮中的细胞间黏附分子有高度亲和力,对鼻病毒感染有较强剧讨太的防御功能。

折叠 双功能酶

露旧例该达训必马浓区销往研究发现 , 在利用基因融合所构建的大的酶分子中,如果用以构成融合蛋白的各个酶节突分子的整个编码序列均保留于新的酶分子中,则融合蛋白一般均保留所构成的酶分推该育命扬继报开子各自的酶活性。并且发现在这些新构建的融合蛋白中,蛋白的正确折叠以及各个酶的活性部位均未受到影响,与单个酶相比,融合称草究衣沿外蛋白的酶的比活力为50%-100%,对于催化连导犯飞均巴种酸少续反应的两种或几清局制医婷冲伯京汽种酶, 利用基因融合的方法构成的融合蛋白可产生“ 邻近效应”。

目前研究发现, β-半乳糖苷酶-半乳糖脱氢酶真顾突渐绝法呢架统风融合蛋白在一定条件下,其论附务确吧含她北部波史偶联反应产生 NAD移满H 的速度是同时加入这两种酶的反应速度的两倍以上。同时过渡态时间缩短近四倍。

折叠 定向药物

定向药物一般由两部分组成:一部分是药物;另一部分是可以与病灶特异性结合的配基。通过融合蛋白技术将十著效烈措这两部分融合在一起, 即可构成一个具有独特构象与功能的蛋白质。

折叠 编辑本段 常见种类

折叠 免疫球蛋白Ig融合蛋白

免疫球蛋白融合蛋白是指在基因水平将目的基因同Ig部分片段基因相连,并在真核或原核细胞中表达出的具有上述两部分结构域的重组蛋白。据目的蛋白与Ig不同片断相连,可将其分为二大类 :一类为Fab(Fv)融合蛋白; 另一类为 Fc融合蛋白。  

折叠 甲状旁腺激素PTH融合蛋白

甲状旁腺激素是由甲状旁腺主细胞合成和分泌的一种单链多肽激素,成熟PTH含84个氨基酸残基, 分子量约为 9500,是人体内调节钙磷代谢及骨转换的最为重要的激素之一。它主要通过作用于靶细胞膜上腺苷酸环化酶系统, 增加胞浆内cAMP及焦磷酸盐 (PPi) 的水平来发挥作用。

折叠 细胞因子重组融合蛋白

细胞因子重组融合蛋白是一类利用基因工程的方法将编码细胞因子和其他有特定功能的蛋白分子基因序列连接并表达相应蛋白质融合产物。其结构特点为将细胞因子功能活性域与其他分子的活性域融合,各组分可发挥协同作用,使融合蛋白的生物学活性较各单体大大增强。

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