2017-10-24 12:23:15

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Alexa Fluor系列染料是由美国生命技术公司(Life technologies)旗下的分子探针公司(Molecular Probes)开发的系列荧光染料,其激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域,应用广泛。 以高亮度、稳定性、仪器兼容性、多种颜色、pH值不敏感以及水溶性为主要特点。

折叠 编辑本段 简介

Alexa Fluor系列染料――可见光谱的最佳染料

Alexa Fluor是荧光标记试剂的一大突破,包括一系列近紫外、可见光和近红外光谱的优良染料,这些试剂产生的偶联物无一例外是实验检测过最好和最亮的,在蓝光和远红光范围提供了多色检测和FRET(荧光共振能量转移)的多种选择。和R-PE或APC联用的Tandem染料扩展了Alexa Fluor在多色检测的应用。

Alexa Fluor是由美国生命技术公司(Life technologies)旗下的分子探针公司(Molecular Probes)开发的系列荧光染料,可应用于生物医学研究中对组织、细胞和生物分子等的标记和定位。其激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域,因而对于绝大多数荧光显微镜都是适用的[1]

折叠 编辑本段 优点

o 亮度 - Alexa Fluor偶联物相比其他染料荧光更强;

o 光稳定性 - Alexa Fluor偶联物相比其他染料光稳定性更强,提供更长的图像捕获时间;

o 仪器兼容性 - Alexa Fluor偶联物的吸收光谱与普通激发光源的主要输出波长相匹配;

o 多种颜色 - Alexa Fluor偶联物有蓝色到红色的多种直接荧光;

o pH值不敏感 - Alexa Fluor染料在一个广泛的pH范围内保持强荧光;

o 水溶性 - Alexa Fluor反应性染料有良好的水溶性, 无需有机试剂即可结合蛋白, 且储存不易产

生沉淀。

折叠 编辑本段 制备工艺

Alexa系列染料通过化学合成方法在香豆素、氧杂蒽(如荧光素和罗丹明)、青色素等染料中引入磺酸酯基团,使得Alexa染料呈负电性和亲水性,从而赋予Alexa染料更好的光学稳定性、发光强度以及pH适应性。但同时Alexa系列产品相比传统荧光染料也要昂贵一些,美国生命技术公司收购分子探针公司后拥有相关专利[2]

折叠 编辑本段 命名方法

Alexa系列染料取名自分子探针公司创始人之一Dick Haugland的儿子Alex Haugland。而该公司旗下的另一款荧光染料产品Marina Blue则取名于其女儿Marina。该系列各染料后面附带的数字则大致表示该染料对应激发光的最大波长(nm)[2]

折叠 编辑本段 光谱特性

Alexa Fluor 350--亮蓝和紫外光激发

Alexa Fluor 350的蓝色荧光比AMCA 亮50%,而且最大发射波长稍短(为442 nm ,AMCA 为448nm),因此更容易与现有的绿色荧光基团区分。

Alexa Fluor 405--近乎完美的匹配蓝色二极管激光器

Alexa Fluor 405的激发/发射最大波长为402/421nm,与荧光显微镜和流式细胞仪405nm谱线的蓝色二极管激光器近乎完美的匹配。Alexa Fluor 405 琥珀酰酯是Cascade Blue 的氨基反应性衍生物,后者是乙酰叠氮化物。Alexa Fluor 405 琥珀酰酯纯度更高且有一个4-哌啶羧酸的间隔,使得荧光基团与其偶联的生物分子之间的反应性最小化。

Alexa Fluor 430--高斯托克斯频移的430nm吸收

少数 400nm-450nm吸收的染料在水溶液中可测荧光偏离500nm。Alexa Fluor 430弥补了这一缺陷,430nm激发时发射在540nm 附近。

Alexa Fluor 488--最好的绿色荧光基团

Alexa Fluor 488 偶联蛋白优于其他荧光素,实验证明比包括Cy2 的其他绿色荧光基团都好。不仅亮度更高,而且光稳定性更好。在pH4-10的范围内保持稳定是其另一优越之处。

Alexa Fluor 532--最适于532nm激发光源的染料

激发发射波长位于绿色荧光Alexa Fluor 488和橙色荧光的Alexa Fluor 546之间,适用于双频Nd:YAG激光器在内的532 nm激发光源。

Alexa Fluor 546--Cy3和四甲基罗丹明的替代物

Alexa Fluor 546 标记的偶联物良好应用于橙色范围光谱,比四甲基罗丹明(TRITC 、TAMRA) 及Cy3荧光更强,容易被汞弧灯激发,发射波长546 nm。

Alexa Fluor 555--优于Cy3的替代物

Alexa Fluor 555 与Cy3 偶联物的光谱相匹配,因此适用于Cy3 的滤光器。Alexa Fluor 555 的总荧光更强,且光稳定性更好,为研究者提供了更长的图像捕获时间。

Alexa Fluor 568--最适于568 nm激发光源

Alexa Fluor 568 的橙红色荧光最适用于激光共聚焦显微镜的Ar–Kr 混合气体激光器,其发射的谱线为568nm。与具有相似最大激发/发射波长的Lissamine Rhodamine B 和Rhodamine Red-X 相比, Alexa Fluor 568的偶联物亮度更高。

Alexa Fluor 594--优于Texas Red的替代品

Alexa Fluor 594偶联物发出红色光,可与绿色荧光探针一同用于多色标记实验。比Texas Red 偶联物有更高的亮度。

Alexa Fluor 610--Alexa Fluor最好的红色染料

Alexa Fluor 610亮度高、光稳定, 可用检测 Texas Red 和Alexa Fluor 594 的光学元件检测。前身是FRET-based Alexa Fluor–phycobiliprotein 的受体染料。新的Alexa Fluor 610 激发/发射波长为612/628nm,容易与绿色荧光基团相区分,适用于多色标记。且Alexa Fluor 610仍为人眼可见,优于Alexa Fluor 633和其他更长波长的荧光团。

Alexa Fluor 633--光稳定性更强

远红光染料大受欢迎,是因为它们的光谱范围在大多数样品的自发荧光之外。He–Ne激光器633nm和红色二极管激光器635nm谱线的广泛应用加速了兼容染料的开发。Alexa Fluor 633偶联物具有亮度和光稳定性,吸收峰在632nm,发射峰在650nm。

Alexa Fluor 635--H-Ne激光器633nm线的最佳染料

新的Alexa Fluor 635染料,其偶联物比Alexa Fluor 633亮度更高,因为它的吸收光谱不会象Alexa Fluor 633、Cy5和tetramethylrhodamine 那样分成两个峰。Alexa Fluor 635同样适用于He–Ne 激光器的633 nm 谱线和红色二极管激光器的635nm谱线,吸收峰在633nm,发射峰在647nm。

Alexa Fluor 647--优于Cy5的替代品

Alexa Fluor 647与Cy5偶联物的光谱及滤光器相匹配。Alexa Fluor 647二抗偶联物的总荧光亮度高于其他公司的Cy5偶联物。在与大多数的蛋白质、寡核苷酸和核酸结合时,Alexa Fluor 647相比Cy5荧光吸收光谱波动很小,因此在同等程度的替换时发出的荧光更强。

Alexa Fluor 680--Cy5.5的替代物

Alexa Fluor 680的激发峰在679nm,最大发射为702nm,与Cy5.5类似。Alexa Fluor 680能够很好的与其他红色荧光团区分,如 Texas Red, R-phycoerythrin, Alexa Fluor 594 和Alexa Fluor 647,是理想的三色与四色标记用染料。

Alexa Fluor 700--远红光二极管激光器的最适染料

Alexa Fluor 700最大吸收在696nm,能够被675-700nm范围的氙弧灯、远红外二极管激光器或dye-pumped lasers 激发。发射光在红外区,峰值为719nm。

Alexa Fluor 750--Alexa Fluor最长波长的产品

Alexa Fluor 750是目前的Alexa Fluor系列产品中波长最长的产品,与Cy7光谱相似。其发射的最大波长为779nm,能够和Alexa Fluor 647及allophycocyanin(APC)区分,适合多色分析。Alexa Fluor 700偶联物752nm的最大激发光使其适用于720–750nm范围的氙弧灯或dye-pumped lasers。

参考资料

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