2018-06-15 00:55:53

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分子生物学
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去磷酸化:是磷酸基团的除去,对许多生物起着"开/关"作用。

防止质粒载体的自身连接,最常用于质粒进行单酶切连接时。

去磷酸化是由于DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。

载体去磷酸化后因自身5'端无磷酸基团,因而不可以和自身3'端连接。但是,载体去磷酸化后3'还是有羟基的,可以与目的片段的5'端磷酸基团连接。载体的5'端和目的片断的3'-OH不能成键,因而形成一个双链各有一个切口的双链环状DNA,双链的切口会在转化入大肠杆菌后,在复制的过程中被修复。

若不进行去磷酸化处理,在连接反应中载体自身会优先进行连接,导致目的片段插入率降低。

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