2021-08-08 11:40:14

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遗传学
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编辑分类

位点(Locus:Loci as pl):染色体上一个基因或者标记的位置。位点有时特指DNA上有表达功能的部分。

基本信息

  • 中文名称

    位相反衬法

  • 外文名称

    Loci as pl

  • 学科

    生物学

  • 性质

    名词

折叠 编辑本段 优势效应

某些限制性内切酶对同一底物的不同位点切割效率不同,这种现象被称为内切酶的位点优势效应。1975年,Thomas和Davis发现EcoRI并不是随机切割λDNA分子上的5个识别位点,其中对λDNA右侧位点的切割速率比中间位点快10倍。Forsblum等发现EcoRI对腺病毒-2不同位点的切割速率不同。Nath和Azzolina则发现EcoRI和HindIII对λDNA不同位点的切割速率有10倍和14倍的差别。Brown和Smith则发现HgaI对?X174某些位点的切割效率明显要高于其它位点。Gingeras和Brooks报道,腺病毒-2上的CTCGAG序列很难被PaeR7I切割,却很容易被PaeR7I的同裂酶XboI切割,这是一个相邻序列影响切割效率的典型例子,CTCGAG5′末端的CT序列降低了切割效率。以上实例中,甲基化不是影响切割速率的因素。

某些酶只能切割有两个识别序列的底物DNA分子。例如,BspMI、SfiI和NgoMIV为同源四聚体蛋白,它们结合2个识别序列,并同时切开4个磷酸二酯键。这些酶的底物DNA分子上必须有两个识别位点,当只有一个识别序列时,切割就变得相当困难。这种现象虽不是很普遍,但在IIs型内切酶中还是相当常见的。这些酶通常情况下为单体,但切割两条链时会很快结合形成二聚体。这些酶包括FokI、BsgI、BpmI和MboII。另外一些酶,如EcoRII和NaeI所需的两个识别位点中,一个位点作为目标被切割,另一位点作为变构因子协助切割。对这些酶而言,第二个协助切割的位点可以在底物DNA上,也可以以寡核苷酸的形式存在。HpaII、NarI和SacII在某些底物的一些位点切割效率很低,或是干脆无法切开,其作用机制尚不明了。

限制性内切酶的一些特性可引起位点优势效应。例如,只有一个识别位点的质粒很难被NaeI、NarI和BspMI切开。pBR322有四个NarI识别位点,在标准条件下,1单位的NarI在1小时内可完全切开其中的两个位点,而即使加入50单位的NarI过夜消化16小时也不能将另外的两个位点完全切开。同样地,pBR322的四个NaeI识别位点中,有两个很容易被切开,第三个被切开的速率较慢,而剩下的一个最难,切割速率仅为前者的1/50。NarI和NaeI在λDNA上各有一个识别位点,但即使加大酶的用量,它们也只能部分切开λDNA。SacII在λDNA上有4个识别位点,其中3个位于序列中间,这些位点的切割速率是剩下的那个靠近右末端位点(第40,386碱基)的50倍。因此这些酶的活力单性的定义均以腺病毒-2为底物,它们在腺病毒-2上有10个以上的识别位点。例如,NarI或NaeI的活性单位定义为:50 μl反应体系,1小时内完全切割1 μg 腺病毒-2 DNA所需要的酶量。

折叠 编辑本段 重组形成

site-specific recombination 位点特异性重组:重组的一类,只发生在特异DNA区域,有短的同源顺序,重组的蛋白不是rec 系统而是int 等,如噬菌体l 的定点插入。

折叠 编辑本段 重组特点

我们可以看到,同源重组一般都在染色体内仍按DNA序列的原来排列次序。但是在所谓位点特异性重组(site-specific recombination)中,DNA节段的相对位置发生了移动,从而得到不同的结果─DNA序列发生重排。位点特异性重组不依赖于DNA顺序的同源性(虽然亦可有很短的同源序列),而依赖于能与某些酶相结合的DNA序列的存在。这些特异的酶能催化DNA链的断裂和重新连接,它们能发动位点特异性重组作用.而在同源重组中,暴露出一些能与RecA这样的蛋白质相结合的顺序,从而发动交叉重组。λ噬菌体DNA能通过重组作用整合进E.coli染色体的特异位点,成为前病毒(provirus,或称前噬菌体,prophage)。λ的整合作用有两个特点:①这种交换是可逆的,原先存在的DNA顺序全部被保存下来,并无丢失;②噬菌体和细菌的DNA之间有一段很短的同源序列,重组交换必须通过其中的一个特定的核苷酸。这两个特点也就是位点特异性重组的共同特点。

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